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問答題用于克隆的 DNA在質(zhì)量上有什么要求？

參考答案： （1）首先是穩(wěn)定性：保持 DNA的高分子量和原有的構(gòu)型；
（2）低蛋白質(zhì)含量；
（3）DNA樣品中應(yīng)...

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1.問答題假定你從黏質(zhì)沙雷氏菌中克隆了一個(gè)基因，并推測(cè)可能是依賴于鋅的金屬蛋白酶，因?yàn)樗袃蓚€(gè)組氨酸和一個(gè)谷氨酸與鋅形成鋅指結(jié)構(gòu)。請(qǐng)你設(shè)計(jì)一個(gè)方案，改變其中一個(gè)組氨酸看看是否改變蛋白酶的活性？

參考答案：通過定點(diǎn)突變改變一個(gè)組氨酸。

2.問答題溶菌酶是破碎細(xì)菌細(xì)胞的有效方法。但有些細(xì)菌的孢子對(duì)溶菌酶不敏感，應(yīng)該如何處理？

參考答案：添加DTT、β—巰基乙醇，或8.0mol／L的尿素等增加敏感性。

3.問答題分離pBR322 DNA可考慮用氯霉素?cái)U(kuò)增，分離 pUCl8質(zhì)粒 DNA則不必用氯霉素?cái)U(kuò)增，為什么？

參考答案：pUCl8的拷貝數(shù)可達(dá) 500—700，即使擴(kuò)增到 3000，也只擴(kuò)大 5—6倍。但是，菌...

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4.問答題從細(xì)菌中分離總 DNA，應(yīng)采取哪些措施獲得高分子量的 DNA？

參考答案：添加酶抑制劑抑制核酸酶活性，溫和操作，加保護(hù)劑等。

5.問答題說(shuō)明合成接頭在基因工程中的主要作用。

參考答案：幫助外源 DNA插入、給載體添加酶切點(diǎn)、調(diào)整讀碼框等。