問答題λYES(酵母—大腸桿菌穿梭載體)是構(gòu)建 cDNA 文庫的高效載體,這種載體是λ噬菌體基因組與一個在大腸桿菌和酵母中都能復(fù)制的質(zhì)粒巧妙結(jié)合而成,它兼有病毒和質(zhì)粒載體的優(yōu)點。cDNA 被插入載體的質(zhì)粒部分,然后它能在體外被包裝入病毒顆粒中,包裝起來的載體感染大腸桿菌的效率比質(zhì)粒本身要高得多。一旦進(jìn)入了大腸桿菌,λYES中的質(zhì)粒序列能夠被誘導(dǎo)重組出λ基因組,并進(jìn)行獨立復(fù)制,這就可以從質(zhì)粒中分離出來,以便進(jìn)行進(jìn)一步的遺傳操作。
為了最大限度地提高克隆效率,載體用只有一個切點的限制性內(nèi)切核酸酶 XhoI(5’-C十 TCGAG)進(jìn)行切割,然后在 dTTP 存在的情況下,同 DNA 聚合酶一起進(jìn)行溫育。將一種具有平末端的雙鏈 cDNA 同一段含由兩段寡聚核苷酸組成的雙鏈寡聚核苷酸接頭連接起來,這兩段寡聚核苷酸的序列是:5’—CGAGATTTACC 和5’—GGTAAATC,它們的 5’端都是磷酸。然后將載體和 cDNA混合并連接在一起。采用這種方法用 2μg的7載體和 0.1μg 的 cDNA,構(gòu)建了一個有 4×10 個克隆的 cDNA 文庫。假定載體長為 43kb,cDNA 的平均長度是 lkb,請估計在連接混合物中,載體分子同cDNA 的比例是多少?
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