下面是將乙肝病毒控制合成病毒表面主蛋白的基因HBsAg導(dǎo)入巴斯德畢赤酵母菌生產(chǎn)乙肝疫苗的過(guò)程及有關(guān)資料，請(qǐng)分析回答下列問(wèn)題。
【資料1】巴斯德畢赤酵母菌是一種甲基營(yíng)養(yǎng)型酵母菌，能將甲醇作為其唯一碳源，此時(shí)AOX1基因受到誘導(dǎo)而表達(dá)【5’AOX1和3’AOX1（TT）分別是基因AOX1的啟動(dòng)子和終止子】。
【資料2】巴斯德畢赤酵母菌體內(nèi)無(wú)天然質(zhì)粒，所以科學(xué)家改造出了圖1所示的pPIC9K質(zhì)粒用作載體，其與目的基因形成的重組質(zhì)粒經(jīng)酶切后可以與酵母菌染色體發(fā)生同源重組，將目的基因整合于染色體中以實(shí)現(xiàn)表達(dá)。
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基因工程操作的基本步驟是：①（）；②（）；③（）；④（）。
從圖中可見(jiàn)，mRNA1和mRNA2的結(jié)合直接導(dǎo)致了（）無(wú)法合成，最終使番茄獲得了抗軟化的性狀。
被①處理后的分散細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)，通常要在培養(yǎng)液中添加一定量的（），此外應(yīng)定期更換培養(yǎng)液，以便保證被培養(yǎng)的細(xì)胞處于無(wú)菌無(wú)毒的環(huán)境中進(jìn)行培養(yǎng)。
利用基因工程進(jìn)行育種，可以培育出具有新性狀的植株，這種育種方式的優(yōu)點(diǎn)是：①（）；②（）。
操作步驟：從人的（）獲取目的基因；目的基因與（）結(jié)合構(gòu)建基因表達(dá)載體；在基因表達(dá)載體中還應(yīng)插入（）和終止子。然后把基因表達(dá)載體導(dǎo)入牛的（），通過(guò)發(fā)育形成的牛體細(xì)胞含人的（），成熟的牛產(chǎn)的的奶中含有（），證明基因操作成功。
在番茄新品種的培育過(guò)程中，將目的基因?qū)胧荏w細(xì)胞的方法叫做（）。
在獲得目的基因的過(guò)程中，PCR技術(shù)相當(dāng)重要。PCR擴(kuò)增反應(yīng)需要在一定的緩沖溶液中加入DNA模板、分別與兩條模板鏈相結(jié)合的兩種（）、四種脫氧核苷酸和（）的DNA聚合酶。
人的基因在牛體內(nèi)能表達(dá)，說(shuō)明人和牛（）。
“分子縫合針”是（）。
④階段是否可使用不添加植物激素的培養(yǎng)基？理由是什么？